产品货号：
RFT203
中文名称：
DNA尿素PAGE电泳试剂盒
英文名称：
DNA Urea PAGE Electrophoresis Kit
产品规格：
60次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制各种浓度的PAGE胶，使用方便。
DNA尿素PAGE电泳是研究寡核苷酸电泳的重要研究手段。可以检测2-500碱基的寡核苷酸片段，理论上可以分辨出相差一个核苷酸的片段。
本试剂盒配胶具体数量与凝胶浓度和凝胶厚度有关。按照每次制备10%凝胶（10×8cm，1mm厚度）计算，试剂盒可使用至少60次。
一、制备凝胶
10% APS配制-5mL：将0.5g APS干粉溶于5mL灭菌水中，彻底溶解后分装，1mL/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10% APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的10% APS。
二、电泳
三、染色
相关搜索：DNA尿素PAGE电泳试剂盒，TBE-Urea-PAGE，PAGE电泳，DNA Urea PAGE Electrophoresis Kit
DNA尿素PAGE电泳是研究寡核苷酸电泳的重要研究手段。可以检测2-500碱基的寡核苷酸片段，理论上可以分辨出相差一个核苷酸的片段。
| 名称 | 规格 | 保存条件 |
| 40% PAA(29:1) | 100mL | 4℃ |
| 10×TBE | 500mL | RT |
| 尿素(电泳级) | 220g | RT |
| APS(干粉) | 5mL | RT(配制后-20℃贮存) |
| TEMED | 0.5mL | 4℃，避光 |
| 2×TBE尿素上样缓冲液(尿素变性胶) | 1mL | 4℃ |
本试剂盒配胶具体数量与凝胶浓度和凝胶厚度有关。按照每次制备10%凝胶（10×8cm，1mm厚度）计算，试剂盒可使用至少60次。
一、制备凝胶
10% APS配制-5mL：将0.5g APS干粉溶于5mL灭菌水中，彻底溶解后分装，1mL/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10% APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的10% APS。
- 参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
- 分离胶配制：根据表格一，将不同体积的成分混合，漩涡搅拌至尿素彻底溶解。
表一．TBE-尿素PAGE分离胶配方表(总体积5mL，适用于厚度1.0mm小板胶)单链DNA长度 最佳凝胶浓度 尿素 40%PAA（29:1） 10×TBE 补水至 10%APS TEMED 200～1000nt 5% 2.1g 0.625mL 0.5mL 5mL 50μL 5μL 50～400nt 8% 1mL 40～350nt 10% 1.25mL 30～300nt 12% 1.5mL 10～150nt 15% 1.875mL 8～120nt 20% 2.5mL - 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于8×10cm凝胶，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm即可)，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1～2cm的水层，使凝胶表面保持平整。
- 静置10～20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明分离胶已聚合。
- 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
- 去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸吸干水分。
- 按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混匀；加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
表二．TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表(总体积2mL，适用于1.0mm厚度胶)凝胶浓度 尿素 40%PAA（29:1） 10×TBE 灭菌水 10%APS TEMED 4% 0.84g 0.2mL 0.2mL 至2mL 20μL 2μL - 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达短玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
- 静置30～60分钟，等待浓缩胶聚合。
- 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
二、电泳
- 1×TBE电泳液配制：
取50mL 10×TBE，加蒸馏水450mL，即配成500mL 1×TBE。将凝胶板固定在电泳装置上，向内槽和外槽中加入足够1×TBE电泳液。用1mL吸头冲洗加样孔1～2次。
注：试剂盒配套的10×TBE缓冲液仅够配制凝胶用，电泳用1×TBE电泳缓冲液请自己制备。 - 样品处理：
取待测样品，加入等体积2×TBE尿素上样缓冲液。如5μL样品加5μL上样缓冲液，短暂离心后70℃处理5分钟后立即冰浴，取5～10μL上样。
TBE-Urea-PAGE中判断单链DNA大小可以选择单链DNA Ladder(20～75nt，货号：RFT202)作为分子量标准。 - 200 V稳压电泳，等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续实验。
恒电压 起始电流 结束电流 电泳时间 200V 15～20 mA/板胶 10～15 mA/板胶 60+ min PAGE浓度 DNA有效分离范围 二甲苯菁 溴酚蓝 二甲苯菁 溴酚蓝 %(W/V) 双链(bp) 单链(nt) 染料迁移率相当于
双链DNA片段粗略大小染料迁移率相当于
单链DNA片段粗略大小3.5 1000～2000 750～2000 460 100 150 45 5.0 80～500 200～1000 260 65 130 35 8.0 60～400 50～400 160 45 75 19 12.0 40～200 30～300 70 20 55 15 15.0 25～150 10～150 60 15 52 10 20.0 6～100 8～120 45 12 50 8
三、染色
- 漂洗：拆下凝胶后，适量蒸馏水漂洗3～5分钟。
- 单链DNA可以用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒(货号：RFT204)，核酸PAGE电泳染色试剂盒(货号：RFT205)或核酸快速银染试剂盒(货号：RFT206)进行染色，也可以选择使用核酸染料进行染色。
- 使用核酸染料染色方法：
TBE-Urea-PAGE胶推荐使用RealGood类染料后染染色，以下程序用RealGood红色核酸染料(货号：RFT232)进行染色。- 即用型染色液配制(配制量：100mL)
即用型RealGood Red核酸染色液 1×TBE 100mL RealGood Red核酸染料 20μL - 染色：凝胶浸泡于即用型染色液中，常温避光摇床40～60rpm震荡染色30分钟。
- 观察：紫外灯或蓝光仪上观察条带。
- 即用型染色液配制(配制量：100mL)
- 使用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒(货号：RFT204)染色：
15% Urea-PAGE 1×TBE 200V 55min
Lane 1-7为20,25,30,35,40,50,75nt ssDNA上样量为1μg；
Lane 8,9,10 ssDNA Marker(20～75nt)上样量为5μL。 - 使用核酸PAGE电泳染色试剂盒（货号：RFT205）染色：
15%尿素变性胶分离单链DNA
Lane 1-7为20,25,30,35,40,50,75nt ssDNA上样量为1μg；
Lane 8 ssDNA Marker(20～75nt)上样量为5μL。
相关搜索：DNA尿素PAGE电泳试剂盒，TBE-Urea-PAGE，PAGE电泳，DNA Urea PAGE Electrophoresis Kit